Неинвазивный пренатальный тест «Prenetix», выполняемый по технологии Roche Diagnostics (Harmony) имеет наибольшее количество клинических исследований среди других аналогов, и уже год как доступен к проведению на территории РФ, что сокращает сроки получения результатов. С учетом роста количества выполняемых НИПТ, точность метода увеличивается, и он предлагается в качестве дополнительного метода тестирования в рамках пренатального скрининга с целью повышения его точности и снижения доли инвазивных процедур. В данном материале рассматриваются технические аспекты проведения тестирования и правила забора, подробно обсуждаются особенности технологии.
ВЕБИНАР СЛЕДУЮЩИЙ
ВЕБИНАР
Тезисы
Неинвазивный пренатальный тест и его место в пренатальном скрининге
Петрова А.И.
Неинвазивное пренатальное тестирование
Представляет собой расчет рисков хромосомных нарушений (анеуплоидий) по внеклеточной фетальной ДНК, свободно циркулирующей в кровотоке беременной женщины. Происхождение внеклеточной ДНК объясняется апоптозом клеток трофобласта.
НИПТ «Prenetix»
Выполняется по технологии Roche Diagnostics (Harmony), прошедшей многочисленные клинические исследования.
Стандартные характеристики и показатели теста
* Трисомия 21: чувствительность — ˃ 99%, доля ложноположительных результатов (ЛПР) — ˂ 0,1%;
* Трисомия 18: чувствительность — 97,4%, доля ЛПР — ˂ 0,1%;
* Трисомия 13: чувствительность — 93,8%, доля ЛПР — ˂ 0,1%.
Дополнительные возможности теста «Prenetix»
* Измерение фетальной фракции (ФФ) — важно не только для достоверного результата НИПТ. Сниженный уровень ФФ свидетельствует о высоком риске анеуплоидий в целом.
* Анализ двуплодной беременности;
* Использование при беременности после ЭКО (своя/донорская яйцеклетка);
* Анализ и выявление анеуплоидий по половым хромосомам.
Технология Harmony
* Это таргетное исследование участков ДНК на специализированных микрочипах с последующей статистической обработкой полученных данных при помощи биоинформатического алгоритма.
*Исследование может быть выполнено, начиная с 10 полных недель гестации (8 эмбриональных недель).
* Время анализа — 4-12 рабочих дней.
Технология проведения анализа
1 этап
* Забор венозной крови в специализированные пробирки.
* Предоставление пациентом информации, связанной с беременностью: возраст, беременность наступила самостоятельно или в цикле ЭКО, срок гестации, количество плодов и т.д. Данные учитываются при расчете индивидуальных рисков.
2 этап: пробоподготовка
* Подготовка образца к анализу — сепарация плазмы.
* Каждому пациенту присваивается индивидуальный номер, пробы маркируются и зашифровываются перед поступлением в лабораторию.
* Работа проводится с большой группой образцов за один раз, поэтому проба замораживается и хранится при t -20°C до набора необходимого количества образцов.
3 этап: создание ДНК-библиотек
* Выделение ДНК проводится на станции QIAsymphony SP/AS, которая осуществляет автоматическую экстракцию нуклеиновых кислот (выделяется вся внеклеточная ДНК плазмы пациента).
* Создание ДНК-библиотек проводится на автоматической станции Freedom EVO (Tecan). Это модульная роботизированная платформа, способная работать в группе с большим количеством проб (дозирование жидкостей + манипуляции с пластиком).
4 этап: анализ полученной геномной библиотеки
Используются микрочипы. Одновременно обрабатываются пробы 96 пациентов.
5 этап: обработка результатов с применением алгоритма FORTE и учетом индивидуальных данных
* Количественная оценка хромосом.
* Количество фетальной ДНК.
* Срок гестации.
* Возраст матери/донора яйцеклетки.
* Тип беременности — ЭКО/своя беременность.
* Количество плодов.
Организация лаборатории
1 зона — пре-ПЦР НИПТ
Рассчитана на процессы, при которых контаминация является критичной:
* пробоподготовка поступающих образцов;
* выделение ДНК на стации QIAsymphony;
* создание ДНК-библиотек.
Чтобы исключить контаминацию извне, поступающий воздух проходит через специальные HEPA-фильтры + поддерживается положительное давление воздуха.
2 зона — пост-ПЦР НИПТ
Риск контаминации несколько ниже.
Проводится:
* анализ проб с использованием микрочипов;
* обработка данных и вывод результатов с дальнейшей выдачей пациентам.
В зоне поддерживается отрицательное давление воздуха.
6 этап: создание отчета
* Отражается Ф.И.О, дата рождения, дата забора, срок беременности на момент забора крови.
* Расчет индивидуальных рисков по 3-м или 5-ти хромосомам — в зависимости от выбранного теста.
* Данные о количестве фетальной ДНК.
Результаты работы лаборатории
Ежегодно количество выполненных проб растет. За год работы после трансфера технологии из США в РФ проанализированы образцы для 3 770 пациентов.
По внутренней статистике выявлены патологии:
* синдром Дауна — 76%;
* с-м Эдвардса — 9%;
* с-м Шерешевского-Тернера — 4%;
* с-м Патау — 3%;
* дисомия Y (XYY) — 3%;
* с-м Клайнфельтера — 3%.
Сбор статистики по исходам беременностей. На данный момент продолжается.
Вопросы
Стоимость анализа? Можно ли выполнять исследование по ОМС?
В нашем лабораторном комплексе цена может варьировать от 18 000 до 25 000 рублей — в зависимости от полноты проведения анализа: исследование на 1, 3 или 5 хромосом, с включением или без включения в анализ анеуплоидий по половым хромосомам.
На данный момент нет возможности выполнять исследование по ОМС. Чтобы включить анализ в ОМС, на данный момент проводится регистрация методики и пробирок для забора биоматериалов на территории РФ. Более широкое применение анализа по ОМС повысило бы точность скрининга 1-го триместра и уменьшило бы количество необоснованных инвазивных вмешательств.
Кровь из вены набирается строго натощак или, наоборот, пациентке нужно поесть?
Качество анализа не зависит от приема пищи перед забором крови. Единственная рекомендация: за 1 час до забора исключить жирную пищу.
Сколько времени занимает весь технологический процесс?
Начиная от стадии выделения ДНК и до получения отчета, по времени в лаборатории занимает 3 полных рабочих дня. На практике от забора крови до отправки отчета проходит 4 дня, поскольку 1 день уходит на то, чтобы связаться с пациентами и передать результаты исследования.
Насколько исключен человеческий фактор в проведении исследования?
Все стадии теста проводятся с использованием роботизированных станций, поэтому ошибка оператора исключена полностью.
С какого и по какой срок беременности НИПТ покажет достоверный результат?
В случае теста «Prenetix», начиная с 10 полных акушерских либо 8 эмбриональных недель и до конца беременности.
Технология проведения НИПТ американская? Лаборатория сертифицирована?
Наша лаборатория изначально проводила исследования в США. Все сотрудники прошли специализированное обучение в Америке и получили сертификаты. Самой лаборатории также выдан сертификат, подтверждающий ее соответствие всем стандартам, которые предъявляет американская компания к проведению данного тестирования.
Где в г. Москве можно сдать данный тест?
Вариантов несколько: обращение непосредственно в лабораторный комплекс «Генетика» либо в одну из клиник партнеров, сотрудничающих с нашей лабораторией.
Расскажете ли вы о своих результатах, когда будет собрана статистика?
Да, это одна из целей нашей лаборатории. По известным исходам беременностей будет собрана полноценная и подтвержденная статистика. Сбор информации по исходам завершенных беременностей занимает определенное время.
По статистике лаборатории, какое количество ЛПР и ЛОР?
На данный момент мы можем представить только объединенную статистику тестов, проведенных в США и РФ. ЛПР по статистике Roshe — 1/10%. Чувствительность: трисомия 21 — ˃ 99%, трисомия 18 — 97,4%, трисомия 13 — 93,8%.
Если скрининг положительный, а НИПТ отрицательный, необходима ли инвазивная диагностика?
Существует определенная схема, в которой указано место НИПТ в скрининге 1 триместра. Если по данным УЗИ имеется высокий риск, необходима инвазивная диагностика. Если по данным УЗИ изменений не выявлено, но по биохимии имеются отклонения, актуально проведение НИПТ.